Ecotoxicological effects of commercial herbicides on the reproductive system of aquatic arthropod Limnocoris submontandoni (Hemiptera: Naucoridae) / Efeitos ecotoxicológicos de herbicidas comerciais no sistema reprodutivo do artrópode aquático Limnocoris submontandoni (Hemiptera: Naucoridae)

Abstract Worldwide, conventional agriculture makes extensive use of pesticides. Although the effects of herbicides are relatively well known in terms of environmental impacts on non-target organisms, there is very little scientific evidence regarding the impacts of herbicide residues on aquatic arthropods from tropical conservation areas. This study evaluates for the first time the toxicity of the herbicides ametryn, atrazine, and clomazone on the aquatic insect Limnocoris submontandoni (Hemiptera: Naucoridae). The lethal concentration (LC50) of herbicides was evaluated for these insects, as well as the effect of the herbicides on the insects' tissues and testicles. The estimated LC50 was 1012.41, 192.42, and 46.09 mg/L for clomazone, atrazine, and ametryn, respectively. Spermatocyte and spermatid changes were observed under the effect of atrazine, and effects on spermatogenesis were observed for some concentrations of clomazone, with apparent recovery after a short time. Our results provide useful information on the effects of herbicide residues in aquatic systems. This information can help minimize the risk of long-term reproductive effects in non-target species that have been previously overlooked in ecotoxicology studies.

Resumo Em todo o mundo, a agricultura convencional faz uso extensivo de pesticidas. Embora os efeitos dos herbicidas sejam relativamente bem conhecidos em termos de impactos ambientais em organismos não-alvo, há pouca evidência científica sobre os impactos de resíduos de herbicidas em artrópodes aquáticos de áreas de conservação tropicais. Este estudo avalia pela primeira vez a toxicidade dos herbicidas ametryn, atrazine e clomazone sobre o inseto aquático Limnocoris submontandoni (Hemiptera: Naucoridae). A concentração letal (LC50) de herbicidas foi avaliada para esses insetos, bem como o efeito dos herbicidas nos tecidos e testículos dos insetos. A LC50 estimada foi de 1012,41, 192,42 e 46,09 mg/L para clomazone, atrazine e ametryn, respectivamente. Alterações nos espermatócitos e espermátides foram observadas sob o efeito de atrazine, e efeitos na espermatogênese foram observados para algumas concentrações de clomazone, com aparente recuperação após um curto período de tempo. Nossos resultados fornecem informações úteis sobre os efeitos de resíduos de herbicidas em sistemas aquáticos. Essas informações podem ajudar a minimizar o risco de efeitos reprodutivos de longo prazo em espécies não-alvo que foram negligenciadas anteriormente em estudos de ecotoxicologia.

Acute and subchronic effects of petroleum on the freshwater fish Hoplias aff. malabaricus / Efeitos agudo e subcrônico do petróleo no peixe de água doce Hoplias aff. malabaricus

Abstract Petroleum water soluble fraction (WSF) impairs organisms, but damages may vary among cell and tissue levels. The aim of the present study was to evaluate the acute (24 h, 48 h, 72 h) and subchronic effects (36 days) of WSF (0%, 25% and 100%) in juveniles of the Neotropical top predator fish Hoplias aff. malabaricus. The effects of WSF were evaluated at a molecular level using the comet assay and micronucleus test for genome damage; and at a morphological level through histological identification of liver pathologic lesions. In both acute and subchronic exposure we found low levels of DNA damage (< 10% of comet tail) and non-significant frequency of micronucleus in WSF exposed fish. The most significant liver lesions in WSF exposed fish were fatty vacuolization, hypertrophy and focal necrosis. Since these tissue injuries were progressive and persistent, their irreversibility may negatively affect fish recruitment, even in a such resistant top predator.

Resumo A fração solúvel de petróleo (WSF) prejudica os organismos, porém os danos podem variar entre os níveis celular e tecidual. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito agudo (24 h, 48 h e 72 h) e subcrônico (36 dias) da WSF (0%, 25% e 100%) em juvenis do peixe neotropical predador topo Hoplias aff. malabaricus. Os efeitos da WSF foram avaliados no nível molecular utilizando o ensaio do cometa e o teste do micronúcleo para o dano genômico e no nível morfológico através da identificação histológica de lesões patológicas no fígado. Em ambas exposições (aguda e subcrônica) encontramos baixos níveis de dano no DNA (< 10% de DNA na cauda do cometa) e frequência de micronúcleos não significativa em peixes expostos a WSF. As lesões mais significativas no fígado dos peixes expostos a WSF foram a vacuolização lipídica, hipertrofia e focos de necroses. Como estas lesões foram progressivas e persistentes, sua irreversibilidade pode afetar negativamente o recrutamento dos peixes, mesmo sendo um predador topo resistente.

Multiple metals and agricultural use affects oxidative stress biomarkers in freshwater Aegla crabs / Presença de múltiplos metais e agricultura afetam biomarcadores de estresse oxidativo em caranguejos de água doce (Aegla)

Metals and agrochemicals are among the main aquatic contaminants, being able to trigger oxidative stress in exposed organisms. The objective of this work was to evaluate the correlation between the level of oxidative stress biomarkers in Aegla crabs (Crustacea, Anomura) with (i) the set of metals present in the streams sediment and (ii) with land uses of three hydrographic basins. The study was carried out in streams (≤ 2nd order) of hydrographic basins in southern Brazil (Basins of Rio Suzana, Rio Ligeirinho-Leãozinho and Rio Dourado). In these streams were quantified the land uses and Cu, Cr, Cd, Fe, Mn and Zn concentrations in the sediment. The enzymes Catalase (CAT) and Glutathione Reductase (GR), as well as the level of membrane lipid peroxidation (TBARS), were analyzed in adult females. The PCA analysis showed that the distribution of metals was different between the basins. Cd, Cr and Fe were correlated positively with CAT and negatively with TBARS and GR. The Dourado basin had the lowest concentrations of these three metals and the highest levels of TBARS. However, in Dourado basin there is predominance of agriculture land use, and TBARS was positively correlated with agricultural land use. Besides in Dourado basin, GR activity was higher than in the others basins, indicating a compensatory response in relation to CAT inhibition. The basins of Suzana and Ligeirinho-Leãozinho rivers had lower TBARS values, which may be due to the induction of CAT in response to metals accumulated in sediment. In summary, this work indicates that in the basins with a higher concentration of toxic metals there is an adaptive response of CAT induction, which reduces TBARS in Aegla. On the other hand, in the basin with lower metallic contamination, TBARS occurrence was primarily influenced by agricultural land use.

Os metais e agroquímicos estão entre os principais contaminantes aquáticos, podendo desencadear estresse oxidativo em organismos expostos. O objetivo deste trabalho foi avaliar uma possível correlação entre o nível de biomarcadores de estresse oxidativo em Aegla (Crustacea, Anomura) com (i) o conjunto de metais presentes no sedimento e (ii) com os usos da terra, em três bacias hidrográficas distintas. O estudo foi realizado em riachos (≤ 2ª ordem) de bacias hidrográficas do Sul do Brasil (Bacias do Rio Suzana, do Rio Ligeirinho-Leãozinho e do Rio Dourado), as quais foram caracterizadas em função do percentual de usos da terra e do nível de Cu, Cr, Cd, Fe, Mn e Zn no sedimento. As enzimas Catalase (CAT) e Glutationa Redutase (GR), bem como o nível de peroxidação lipídica das membranas (TBARS), foram analisadas em fêmeas adultas. Uma análise de PCA mostrou que a distribuição de metais foi distinta entre as bacias. Cd, Cr e Fe no sedimento correlacionaram positivamente com a CAT e negativamente com TBARS e GR. Entretanto, a bacia do Dourado apresentou os menores níveis destes três metais e os maiores níveis de TBARS, o que pode ser justificado pelo predomínio da agricultura nesta bacia, já que o TBARS correlacionou positivamente com o percentual de uso agrícola. Nesta bacia, a atividade da GR foi mais alta do que nas outras, indicando uma resposta compensatória em relação a inibição da CAT. As bacias do rio Suzana e rio Ligeirinho-Leãozinho apresentaram valores menores de TBARS, o que pode decorrer da indução da CAT em função dos metais acumulados no sedimento. Em síntese, este trabalho indica que nas bacias com maior concentração de metais tóxicos ocorre uma resposta adaptativa de indução da CAT, o que reduz os níveis de TBARS em Aegla. Por outro lado, na bacia com menor contaminação metálica os níveis de TBARS foram primariamente influenciados pelo uso agrícola.

Water quality assessment of the Demetrio stream: an affluent of the Gravataí River in the South of Brazil / Qualidade da água do arroio Demetrio: um afluente do rio Gravataí no sul do Brasil

The Gravataí River basin, one of the main water sources of the metropolitan region of Porto Alegre, is among the ten most polluted rivers in Brazil. Water quality is monitored only through physico-chemical and microbiological parameters in Brazil, and in this context, considering the importance of the use of biomarkers in complementing the analysis of water, the present study aimed to evaluate the environmental quality of the main affluent of the Gravataí River, Demetrio stream, through physico-chemical, microbiological, and cytogenotoxic criteria, at the stream source (P1), whereas samples P2 and P3 were obtained from the upstream near the area with the highest urban density and the downstream near the meeting point with the Gravataí River, respectively. The results for copper concentration and color classified the Demetrio stream as Class 4 in general, that is, the water is suitable only for navigation and to landscape harmony. The main genotoxic alterations (micronuclei and nuclear buds) were observed in P2, in which were obtained the highest levels of copper, in addition to iron and manganese. Anthropic interventions were observed in P1 and P2; however, due to its low metal concentration, P3, near the Gravataí River, manifested an improvement in environmental quality.

A bacia do rio Gravataí, uma das principais fontes de água da região metropolitana de Porto Alegre, está entre os dez rios mais poluídos do Brasil. No Brasil a qualidade da água é monitorada apenas através de parâmetros físico-químicos e microbiológicos e, nesse contexto, considerando a importância do uso de biomarcadores para complementar a análise da água, o presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade ambiental do principal afluente do Rio Gravataí, o arroio Demétrio, através de critérios físico-químicos, microbiológicos e citogenotóxicos, na nascente do arroio (P1), a montante e próximo à área com maior densidade urbana (P2) e a jusante e próximo ao ponto de encontro com o rio Gravataí (P3). Os resultados para a cor da água e para a concentração de cobre classificaram o arroio Demétrio como Classe 4 em geral, ou seja, esta água é adequada apenas para navegação e harmonia da paisagem. As principais alterações genotóxicas (micronúcleos e brotos nucleares) foram observadas no P2, no qual foram obtidos os maiores teores de cobre, além de ferro e manganês. Intervenções antrópicas foram observadas em P1 e P2; no entanto, devido à sua baixa concentração de metais, o P3, próximo ao rio Gravataí, manifestou uma melhoria na qualidade ambiental.

Assessment of carbamazepine acute toxicity in the cockle Cerastoderma edule through chemical, physiological and biochemical tools / Avaliação da toxicidade aguda da carbamazepina no berbigão Cerastoderma edule por meio de ferramentas químicas, fisiológicas e bioquímicas

The cockle Cerastoderma edule was exposed to four concentrations (5, 10, 20 and 70 µg L-1) of carbamazepine (CBZ). This anticonvulsant was found to alter the mussel behavior of by reducing its clearance rate (CR). Analysis of CBZ accumulation in tissues of C. edule was carried out using HPLC-UV after 48 or 96 hours of exposure. In addition, an overproduction of H2O2 by the bivalves was detected following exposure to CBZ but nitrite levels remained unchanged. Moreover, superoxide dismutase and catalase activities showed a significant increase in relation to their contact with CBZ. The activity of the biotransformation enzyme gluthatione-S-transferase did not change during exposure. Malondialdehyde (MDA) levels indicating cellular damage, increased when bivalves were exposed to 20 and 70 µg l-1 of carbamazepine for 96 h CBZ. The results also indicate that acetylcholinesterase activity (AChE) was inhibited in all CBZ concentrations during the 48 h exposure period. However, during the 96 h exposure period, AChE was only inhibited at the highest concentration. Further studies are needed now for more exploration of the toxicity of CBZ since it could be bioaccumulable throughout the food web and may affect non-target organisms.

O berbigão Cerastoderma edule foi exposto a quatro concentrações (5, 10, 20 e 70 µg L-1) de carbamazepina (CBZ). Este anticonvulsivante alterou o comportamento do mexilhão, reduzindo sua taxa de depuração (CR). A análise do acúmulo de CBZ nos tecidos de C. edule foi realizada por HPLC-UV após 48 ou 96 horas de exposição. Além disso, uma superprodução de H2O2 pelos bivalves foi detectada após a exposição à CBZ, mas os níveis de nitrito permaneceram inalterados. Além disso, as atividades de superóxido dismutase e catalase apresentaram aumento significativo em relação ao contato com CBZ. A atividade da enzima de biotransformação glutationa-S-transferase não se alterou durante a exposição. Os níveis de malondialdeído (MDA), indicando dano celular, aumentaram quando os bivalves foram expostos a 20 e 70 µg l-1 de carbamazepina por 96 h CBZ. Os resultados também indicam que a atividade da acetilcolinesterase (AChE) foi inibida em todas as concentrações de CBZ durante o período de exposição de 48 horas. No entanto, durante o período de exposição de 96 horas, a AChE foi inibida apenas na concentração mais alta. Mais estudos são necessários agora para uma maior exploração da toxicidade da CBZ, uma vez que pode ser bioacumulável em toda a cadeia alimentar e pode afetar organismos não alvo.

Multiple metals and agricultural use affects oxidative stress biomarkers in freshwater Aegla crabs / Presença de múltiplos metais e agricultura afetam biomarcadores de estresse oxidativo em caranguejos de água doce (Aegla)

Metals and agrochemicals are among the main aquatic contaminants, being able to trigger oxidative stress in exposed organisms. The objective of this work was to evaluate the correlation between the level of oxidative stress biomarkers in Aegla crabs (Crustacea, Anomura) with (i) the set of metals present in the streams sediment and (ii) with land uses of three hydrographic basins. The study was carried out in streams (≤ 2nd order) of hydrographic basins in southern Brazil (Basins of Rio Suzana, Rio Ligeirinho-Leãozinho and Rio Dourado). In these streams were quantified the land uses and Cu, Cr, Cd, Fe, Mn and Zn concentrations in the sediment. The enzymes Catalase (CAT) and Glutathione Reductase (GR), as well as the level of membrane lipid peroxidation (TBARS), were analyzed in adult females. The PCA analysis showed that the distribution of metals was different between the basins. Cd, Cr and Fe were correlated positively with CAT and negatively with TBARS and GR. The Dourado basin had the lowest concentrations of these three metals and the highest levels of TBARS. However, in Dourado basin there is predominance of agriculture land use, and TBARS was positively correlated with agricultural land use. Besides in Dourado basin, GR activity was higher than in the others basins, indicating a compensatory response in relation to CAT inhibition. The basins of Suzana and Ligeirinho-Leãozinho rivers had lower TBARS values, which may be due to the induction of CAT in response to metals accumulated in sediment. In summary, this work indicates that in the basins with a higher concentration of toxic metals there is an adaptive response of CAT induction, which reduces TBARS in Aegla. On the other hand, in the basin with lower metallic contamination, TBARS occurrence was primarily influenced by agricultural land use.

Os metais e agroquímicos estão entre os principais contaminantes aquáticos, podendo desencadear estresse oxidativo em organismos expostos. O objetivo deste trabalho foi avaliar uma possível correlação entre o nível de biomarcadores de estresse oxidativo em Aegla (Crustacea, Anomura) com (i) o conjunto de metais presentes no sedimento e (ii) com os usos da terra, em três bacias hidrográficas distintas. O estudo foi realizado em riachos(≤ 2ª ordem) de bacias hidrográficas do Sul do Brasil (Bacias do Rio Suzana, do Rio Ligeirinho-Leãozinho e do Rio Dourado), as quais foram caracterizadas em função do percentual de usos da terra e do nível de Cu, Cr, Cd, Fe, Mn e Zn no sedimento. As enzimas Catalase (CAT) e Glutationa Redutase (GR), bem como o nível de peroxidação lipídicadas membranas (TBARS), foram analisadas em fêmeas adultas. Uma análise de PCA mostrou que a distribuição de metais foi distinta entre as bacias. Cd, Cr e Fe no sedimento correlacionaram positivamente com a CAT e negativamente com TBARS e GR. Entretanto, a bacia do Dourado apresentou os menores níveis destes três metais e os maiores níveis de TBARS, o que pode ser justificado pelo predomínio da agricultura nesta bacia, já que o TBARS correlacionou positivamente com o percentual de uso agrícola. Nesta bacia, a atividade da GR foi mais alta do que nas outras, indicando uma resposta compensatória em relação a inibição da CAT. As bacias do rio Suzana e rio Ligeirinho-Leãozinho apresentaram valores menores de TBARS, o que pode decorrer da indução da CAT em função dos metais acumulados no sedimento. Em síntese, este trabalho indica que nas bacias com maior concentração de metais tóxicos ocorre uma resposta adaptativa de indução da CAT, o que reduz os níveis de TBARS em Aegla. Por outro lado, na bacia com menor contaminação metálica os níveis de TBARS foram primariamente influenciados pelo uso agrícola.

Tertiary hospital sewage as reservoir of bacteria expressing MDR phenotype in Brazil / Esgoto de hospital terciário como reservatório de bactérias expressando o fenótipo MDR no Brasil

High doses of antibiotics used in hospitals can affect the microbial composition of sewers, selecting resistant bacteria. In this sense, we evaluated the antibiotic resistance profile and the multiresistant phenotype of bacteria isolated in sewage from a tertiary hospital in the interior São Paulo state, Brazil. For bacteria isolation, 10 µL of sewage samples were sown in selective culture media and the isolates were identified using VITEK-2 automatized system. The antibiotic sensitivity test was performed by disk diffusion. High percentages of resistance were found for amoxicillin, ampicillin, ceftazidime, clindamycin, vancomycin and the multidrug-resistant phenotype (MDR) was attributed to 60.7% of the isolates. Our results show bacteria classified as critical/high priority by WHO List of Priority Pathogens (Enterococcus and Staphylococcus aureus resistant to vancomycin and Enterobacteriaceae resistant to carbapenems) in hospital sewage. Therefore, the implementation of disinfection technologies for hospital sewage would reduce the bacterial load in the sewage that will reach urban wastewater treatment plants, minimizing superficial water contamination and bacterial resistance spread in the environment.

Altas doses de antibióticos utilizados em hospitais podem afetar a composição microbiana dos esgotos, selecionando bactérias resistentes. Nesse sentido, avaliamos o perfil de resistência a antibióticos e o fenótipo multirresistente de bactérias isoladas em esgoto de um hospital terciário no interior do estado de São Paulo, Brasil. Para o isolamento de bactérias, foram semeados 10 µL das amostras de esgoto em meios de cultura seletivos e os isolados foram identificados usando o sistema automatizado VITEK-2. O teste de sensibilidade aos antibióticos foi realizado por disco-difusão em ágar. Elevadas porcentagens de resistência foram encontradas para amoxicilina, ampicilina, ceftazidima, clindamicina, vancomicina e o fenótipo multirresistente (MDR) foi atribuído a 60,7% dos isolados. Nossos resultados mostram bactérias classificadas como prioridade crítica/alta pela Lista de Patógenos Prioritários da OMS (Enterococcus e Staphylococcus aureus resistentes à vancomicina e Enterobacteriaceae resistentes aos carbapenêmicos) no esgoto hospitalar. Sendo assim, implementação de tecnologias de desinfecção do esgoto hospitalar reduziriam a carga bacteriana no esgoto que chegará às estações de tratamento de esgoto urbanas, minimizando a contaminação dos ecossistemas hídricos receptores e a disseminação da resistência bacteriana no ambiente.

BPA toxicity during development of zebrafish embryo / Toxicidade do BPA durante o desenvolvimento de embriões de Zebrafish

Bisphenol A (BPA) is a monomer used in the production of polycarbonate, a polymer commonly found in plastics, epoxy resins and thermal papers. The presence of BPA in food, water, air and dust has been of great concern in recent years not only due to environmental and ecological issues but also because of its supposed risk to public health related to its mutagenic and carcinogenic potential. In this study we evaluated the toxicity of bisphenol A in zebrafish embryos (Danio rerio) and determined the 50% lethal concentration (LC50) of this chemical. BPA was used at concentrations ranging from 1 µM to 100 µM in E3 medium/0.5% dimethylsulfoxide (DMSO) from previously prepared stock solutions in 100% DMSO. Controls included embryos exposed only to E3 medium or supplemented with 0.5% DMSO. Camptothecin (CPT), a known inhibitor of cell proliferation was used as positive control at a concentration of 0.001 µM in E3 medium/0.5% DMSO. Adults zebrafish were placed for breeding a day before the experimental set up, then, viable embryos were collected and selected for use. Experiments were carried out in triplicates, according to specifications from Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). One embryo/well (25 embryos per concentration) was distributed in 96 well microplates in presence or absence of the chemicals. The plates were kept in BOD incubators with a controlled temperature of 28.5 ºC and with photoperiod of 14 h light:10 h dark. After 24h, 48h, 72h and 96h exposure, the exposed embryos were evaluated according to the following parameters: mortality, coagulation, rate of heartbeat, hatching and presence of morphological abnormalities. Photography was obtained by photomicroscopy. Apoptosis was evaluated by DNA ladder assay. DNA was extracted by phenol:chloroform method and analyzed by 2% agarose gel electrophoresis. DNA fragments were visualized after ethidium bromide staining in ultraviolet transilluminator. The LC50 determined for BPA was 70 µM after 24 hours, 72 µM after 48 hours, 47 µM after 72 hours and 31 µM after 96 hours exposure. BPA induced morphological and physiological alterations such as yolk sac and pericardial edema, hatching delay or inhibition, spine deformation, decreasing in heartbeat rate and mortality. In conclusion, this study demonstrated that BPA induced marked malformations in zebrafish embryos at concentrations above 25 µM corroborating the current concerns related to the widespread presence of BPA in the air, food and water used by humans as well as in the bodily fluids and tissues.

Bisfenol A (BPA) é um monômero utilizado na produção de policarbonato, um polímero comumente encontrado em plásticos, resinas epóxi e papéis térmicos. A presença de BPA em alimentos, água, ar e poeira tem sido motivo de grande preocupação nos últimos anos, não só devido a questões ambientais e ecológicas, mas também ao suposto risco para a saúde pública relacionado ao seu potencial mutagênico e carcinogênico. Neste estudo avaliamos a toxicidade do bisfenol A em embriões de peixe-zebra (Danio rerio) e determinamos a concentração letal 50% (LC50) deste composto químico. O BPA foi usado na faixa de concentração entre 1 µM e 100µM em meio E3/0,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), preparado a partir de soluções estoques em 100% DMSO. Os controles negativos incluíram embriões expostos apenas ao meio E3 ou suplementado com 0,5% DMSO. Camptotecina (CPT), um conhecido inibidor da proliferação celular, foi usado como controle positivo a uma concentração de 0,001 µM em meio E3/0,5% DMSO. Peixes-zebra adultos foram colocados para reprodução um dia antes da montagem experimental, em seguida, embriões viáveis foram coletados e selecionados para uso. Os experimentos foram realizados em triplicata, de acordo com as especificações da Organização para Cooperação e Desenvolvimento Econômico (OCDE). Um embrião/ poço (25 embriões por concentração) foi distribuído em microplacas de 96 poços na presença ou ausência dos compostos químicos. As placas foram mantidas em incubadoras BOD com temperatura controlada de 28,5 ºC e com fotoperíodo de 14h claro:10h escuro. Após 24h, 48h, 72h e 96h, os embriões expostos foram avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: mortalidade, presença de coagulação, taxa do batimento cardíaco, eclosão e presença de anormalidades morfológicas. Fotografias foram obtidas por fotomicroscopia. A apoptose foi avaliada pelo ensaio de DNA ladder. O DNA foi extraído pelo método fenol:clorofórmio e analisado por eletroforese em gel de agarose a 2%. Fragmentos de DNA foram visualizadas após coloração com brometo de etídio em um transiluminador ultravioleta. A LC50 determinada para o BPA foi 70 µM após 24 horas, 72 µM após 48 horas, 47 µM após 72 horas e 31 µM após exposição por 96 horas. O BPA induziu alterações morfológicas e fisiológicas como edema de saco vitelino e edema pericárdico, atraso no tempo ou inibição da eclosão, deformação da coluna vertebral, diminuição da taxa de batimentos cardíacos e mortalidade. Em conclusão, este estudo demonstrou que o BPA induziu grande número de malformações em embriões de peixe-zebra em concentrações acima de 25 µM, corroborando as preocupações atuais relacionadas a presença generalizada do BPA no ar, alimento e água usados pelos seres humanos bem como nos fluidos e tecidos corporais.

Evaluation of salivary protein patterns among a rural population exposed and non-exposed to arsenic-contaminated drinking water in areas of Tucumán (Argentina): a pilot study

Abstract Arsenic contamination in the environment and groundwater is a major global public health problem. Several researchers suggest that the toxicity of arsenic could be related to oral cancer development, usually resulting from potentially malignant lesions. During pathological processes, salivary proteins suffer modifications, which could lead to the discovery of new biomarkers. Objective To analyze the protein profile in human saliva samples from a rural population exposed to high levels of arsenic in drinking water and its association with potentially malignant lesions. Methodology This observational, analytic and cross-sectional design included 121 patients from the state of Graneros (Tucumán, Argentina). Arsenic concentration in drinking water was determined and, according to the values obtained, individuals were divided into 2 groups: exposed group and non-exposed group. Saliva samples were obtained, and total protein concentration was measured by Bradford method. Finally, Laemmli SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was conducted to obtain the protein profile. Results Total protein concentration in saliva was lower in the exposed group than in the non-exposed group. Average areas of 20 and 42 KDa bands were significantly lower in exposed group than non-exposed group. Conclusion Chronic intake of high arsenic concentrations in drinking water produces changes in the salivary protein profile, which is associated with the presence of potentially malignant lesions.

Assessment of heavy metals and its impact on DNA fragmentation in different fish species / Avaliação de metais pesados e seu impacto na fragmentação de DNA em diferentes espécies de peixe

Abstract This study was conducted to assess water pollution by examining DNA fragmentation in selected fish organs (kidney, liver, gills, and muscle tissue) from Wallago attu, Sperata sarwari, Vulgaris vulgaris, and Labeo rohita collected from a known polluted section of the Chenab River, Pakistan, and from a control site. The fish were caught using a gill net and were assigned to three different weight groups (W1, W2, and W3) to study the degree of variation in DNA fragmentation in relation to body weight. In fish from the polluted site, DNA fragmentation was higher in kidney, liver, gills, and muscles, compared to the control. No significant DNA fragmentation was observed in fish collected from the control site. Highly significant (P < 0.01) relationship between body weight and DNA fragmentation was found in the organs of fish procured at the contaminated site. DNA fragmentation in body organs was found to be affected by the concentrations of lead, copper, nickel, and cadmium in W. attu, S. sarwari, L. rohita, and V. vulgarus harvested from Chenab River. DNA fragmentation in different freshwater fish species is therefore a reliable biomarker of water pollution.

Resumo Este estudo foi conduzido para avaliar a poluição da água examinando a fragmentação do DNA em órgãos de peixes selecionados (rim, fígado, brânquias e tecido muscular) de Wallago attu, Sperata sarwari, Vulgaris vulgaris e Labeo rohita coletados de uma conhecida área poluída do rio Chenab, Paquistão e de um local de controle. Os peixes foram capturados usando uma rede branquial e foram divididos em três grupos de pesos diferentes (W1, W2 e W3) para estudar o grau de variação na fragmentação do DNA em relação ao peso corporal. Nos peixes do local poluído, a fragmentação do DNA foi maior nos rins, fígado, brânquias e músculos, em comparação ao controle. Não foi observada fragmentação significativa do DNA em peixes coletados no local de controle. Relação altamente significativa (P <0,01) entre o peso corporal e a fragmentação do DNA foi encontrada nos órgãos dos peixes adquiridos no local contaminado. Verificou-se que a fragmentação do DNA nos órgãos do corpo é afetada pelas concentrações de chumbo, cobre, níquel e cádmio em W. attu, S. sarwari, L. rohita e V. vulgarus colhidos no rio Chenab. A fragmentação do DNA em diferentes espécies de peixes de água doce é, portanto, um biomarcador confiável da poluição da água.

Genotoxicity effects on Geophagus brasiliensis fish exposed to Doce River water after the environmental disaster in the city of Mariana, MG, Brazil / Efeitos da genotoxicidade em peixes da espécie Geophagus brasiliensis expostos a água do Rio Doce após o desastre ambiental na cidade de Marina, MG, Brasil

Abstract The Doce River basin has suffered the largest environmental accident ever occurred in Brazil with the influx of tailings from Fundão and Santarém, belonging to Samarco mining company, due to the disaster in Mariana. A spill between 50 and 60 million m3 of tailings was estimated by the company. According to Samarco, the wastewater was composed mainly of clay, silt and heavy metals like iron, copper and manganese. Thereby, the objective of the present study was evaluated the genotoxic damage in juvenile of Geophagus brasiliensis (Quoy e Gaimard, 1824) exposed to Doce river water before (DRWBA - Doce River water before acident) and after (DRWAA - Doce River water after acident) the influx of tailings from the Germano and Santarém Dam disasters in Mariana, MG, Brazil. For this, 24 individuals of the species G. brasiliensis (obtained on IFES/ALEGRE fish culture) were submitted to a bioassay with three treatments and eight replicates. The treatments were: 1) Control water (water from the urban water supply system, filtered with a 0.45 µm membrane), 2) DRBA and 3) DRAA. After 96 h, these fishes were anesthetized to remove blood for evaluation of genotoxic damage (micronucleus and comet). For the bioassay, a total of 80 L of The Doce River water were collected before the influx of tailings and after the influx and then submitted to metal quantification analysis. Fish exposed to DRWBA and DRWAA treatments showed a significant increase in both the number of erythrocyte micronuclei and the DNA damage index in relation to the control fish; however, they did not present any differences between the two treatments. The results demonstrate that the DRWBA treatment was already genotoxic for the fish, mainly due to dissolved Cu concentrations in the water. The DRWAA treatment probably presented genotoxicity due to the increase in the dissolved fraction and synergistic effects of several metals found in the tailings of the Mariana accident.

Resumo A bacia do Rio Doce sofreu o maior acidente ambiental com o influxo de rejeitos de Fundão e Santarém, pertencentes à empresa de mineração Samarco, devido ao desastre em Mariana. Um derramamento entre 50 e 60 milhões de m3 de rejeitos foi estimado pela empresa. De acordo com a Samarco, o rejeito despejado era composto principalmente de argila, silte e alguns metais pesados como ferro, cobre e manganês. Com isso, o presente estudo teve como objetivo avaliar os danos genotóxicos em juvenis de Geophagus brasilienses expostos a água do rio Doce antes (DRWAA - água do Rio Doce antes do acidente) e depois (DRWBA- água do Rio Doce depois do acidente) da chegada dos rejeitos do rompimento das barragens de Germano e Santarém em Mariana, MG, Brasil. Para isso, 24 indivíduos da espécie G. brasilienses (obtidos na piscicultura do IFES/ALEGRE) foram submetidos a um bioensaio com três tratamentos e oito réplicas. Os tratamentos eram: 1) Controle (com água do abastecimento urbano, filtrada com filtro analítico de 0,45 µm); 2) DRWBA e 3) DRWAA. Após um período de 96 h, esses peixes foram anestesiados para retirada de sangue para avaliação dos danos genotóxicos (micronúcleo e cometa). Para a realização do bioensaio, um total de 80 L de água do Rio Doce foram coletados antes da chegada dos rejeitos e outros 80 L foram coletados depois da chegada dos rejeitos e ambas foram submetidas a análises de quantificação de metal. Os peixes expostos ao DRWBA e ao DRWAA apresentaram um aumento significativo na quantidade de micronúcleos eritrocitários e no índice de danos do DNA em relação aos peixes controle, no entanto não apresentaram diferenças entre si. Os resultados obtidos demonstram que a DRWBA já era genotóxica para os peixes, principalmente, em função das concentrações de Cu dissolvido na água. A DRWAA apresentou genotixicidade, provavelmente, em função do aumento da fração dissolvida e do efeito sinérgico de diversos metais presentes nos rejeitos do acidente de Mariana.

Determination of acute toxicity of ammonium in juvenile Patagonian blenny (Eleginops maclovinus) / Determinação da toxicidade aguda do amônio em Babosas-da-Patagônia (Eleginops maclovinus) juvenis

Abstract Deionized ammonium (NH3) acute toxicity (LC50-96h) in Patagonian blenny juveniles (Eleginops maclovinus) was assessed. Concentrations of deionized ammonium in salt water were prepared by using 24.09 ± 2.1 g ammonium chloride (NH4Cl). Fish were exposed in triplicates to different ammonium concentrations: 0.05; 0.094; 0.175; 0.325 and 0.605 mg NH3 L-1. Additionally, a control group was included. Experimental fish were kept at a photoperiod of 16:8h. Average temperatures were 16.24 ± 1.40 °C. Oxygen concentration was 7.16 ± 0.40 mg L -1. Water pH was 7.89 ± 0.2. LC50-96 h, was estimated by using Probit statistical method (95% intervals) using EPA software (1993). Juveniles of E. maclovinus showed a LC50-96h of 0.413mg NH3 L-1 value, different from most marine species. This study presents the first record of ammonium toxicity in marine species of Chile.

Resumo A toxicidade aguda (LC50-96h) de amônia deionizada (NH3 ) em Babosas-da-Patagônia (Eleginops maclovinus) juvenis foi avaliada. As concentrações de sal de amônia deionizada em água foram preparados com 24,09 ± 2,1 g de cloreto de amônio (NH4Cl). Os peixes foram expostos em triplicata a diferentes concentrações de amônia: 0,05; 0,094; 0,175; 0,325 e 0,605 mg L-1 de NH3. Além disso, um grupo de controle foi incluído. Peixes experimentais foram mantidos em fotoperíodo de 16: 8h. As temperaturas médias foram 16,24 + 1,40 °C. A concentração de oxigênio foi 16.24 +1.40°C mg L-1 . O pH da água foi de 7,89 + 0,2. h LC50-96h, foi estimada usando o método estatístico de Probit (intervalos de 95%) usando o software EPA (1993). E. maclovinus juvenis apresentaram uma LC 50-96h de 0.413mg NH3 L-1 valor diferente da maioria das espécies marinhas. Este estudo apresenta o primeiro registro de toxicidade amónio em espécies marinhas do Chile.

Evaluación de riesgo a la salud y contaminantes en agua de bebida: Importancia de la ingesta de agua / Evaluation of health risk and contaminants in drinking water: Importance of the water intake

Se evaluó la importancia del consumo diario de agua por ingesta en la evaluación de riesgo a la salud humana (ERS) de contaminantes presentes en agua subterránea de pozos domiciliarios en la ciudad de Azul, Argentina. El riesgo probabilístico acumulativo se calculó en base al modelo de la Agencia de Protección Ambiental de Estados Unidos (USEPA) para cuatro grupos de edad (5, 10, 15 años y adultos). Los resultados fueron comparados mediante la aplicación de un consumo diario de agua por ingesta estimado utilizado con frecuencia en la literatura frente a una cantidad ingerida local. De las seis variables usadas (Concentración de la sustancia peligrosa en el agua; Ingesta diaria de agua (I); Frecuencia de exposición; Duración de la exposición; Peso corporal del individuo expuesto; Factor de corrección para el tiempo promedio de exposición crónica), la Ifue la variable más influyente en el va­lor del riesgo presentando diferencias significativas entre los resultados derivados de ambos tipos de I. La diferencia más alta fue en los 5 años de edad, grupo que presentó un riesgo acumulado asociado con I local 98% más bajo respecto del riesgo calculado utilizando I basada en la literatura. La selección de la I tuvo un impacto significativo en los resultados del riesgo, lo que sugiere una cuidadosa elección de las variables de entrada al modelo de la evaluación del riesgo para evitar subestimaciones o sobreestimaciones.

We evaluated the importance of the daily consumption of water by ingestion on health risk assessment (HRA) from pollutants present in shallow groundwater from residential wells in the city of Azul, Argentina. The probabilistic cumulative risk was calculated based on the model of the United States Environmental Protection Agency (USEPA) for four age groups (5, 10, 15 years and adults). The results were compared by applying a daily consumption of water by estimated intake frequently used in the literature against a local ingested amount. From the six variables used (Concentration of the hazardous substance in water, Daily water intake (I), Frequency of exposure, Duration of exposure, Body weight of the exposed individual, Correction factor for the average time of chronic exposure), I was the most influential variable in the value of risk, presenting significant differences between the results de­rived from both types of I. The highest difference was in the 5 years of age, a group that presented an accumulated risk associated with local I 98% lower regarding the risk calculated using I based on the literature. The selection of I had a significant impact on risk outcomes, suggesting a careful choice of input variables to the risk assessment model to avoid underestimation or overestimation.

Imposex in Stramonita haemastoma from coastal sites of Cartagena, Colombia / Imposex em Stramonita haemastoma em locais costeiros de Cartagena, Colômbia

Abstract Imposex is the development of male sexual characteristics caused by the toxic effects of some chemicals that acts as an endocrinal disruptor. Antifouling paints contain these chemicals. Cartagena lacks studies to indicate the extent of imposex in its coastal waters. The aim of this study was to determine the prevalence of imposex in the gastropod Stramonita haemastoma in Cartagena, Colombia. Specimens were collected during 2013 from locations of high and low influence of port activity. Morphometric measurements and the frequency of the occurrence of imposex were registered. The comparison among morphometric variables showed statistically significant differences between the two sites studied. Furthermore, the females of the S. haemastoma species presented an imposex frequency of 93.1% in Birds' Island, Cartagena Bay, compared to 31.8% in La Bocana. The relative penis size index or RPLI (10.145 and 3.231) and vas deferens sequence index or VDSI (2.83 and 1.16), showed possible contamination by organotin compounds in both places.

Resumo Imposex é o desenvolvimento de características sexuais masculinas causadas por poluentes tóxicos de alguns produtos químicos que atuam como desreguladores endócrinos. Tintas anti-incrustantes são as que contêm estes produtos químicos. Cartagena carece de estudos para indicar a extensão do imposex nas suas águas costeiras. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de imposex no gastrópode Stramonita haemastoma em Cartagena, Colômbia. Os espécimes foram coletados durante 2013 de locais de alta e baixa influência da atividade portuária. Foram registradas as medidas morfométricas e a frequência da ocorrência do imposex. A comparação entre as variáveis morfométricas mostrou diferenças estatisticamente significantes entre os dois locais estudados. Além disso, as fêmeas da espécie S. haemastomaapresentaram uma frequência de imposex de 93,1% na Ilha das Aves, Baía das Cartagena, em comparação com 31,8% em La Bocana. O índice do comprimento relativo do pênis ou RPLI (10,145 e 3,231) e o índice da sequência do vaso deferente ou VDSI (2,83 e 1,16), mostraram possível contaminação por compostos organoestânicos em ambos os locais.

Exposición a nitratos en agua y su relación con disfunción de la glándula tiroides: revisión sistemática ¿Existen riesgos para la salud de la población? / Exposure to nitrates in drinking water and its association with thyroid gland dysfunction

Background: Nitrate exposure may be associated with thyroid gland dysfunction. Aim: To review the available evidence about the relationship between nitrates in drinking water and thyroid gland dysfunction. Material and Methods: A wide search was performed using Medline, Cochrane, Lilacs, IBECS and Scielo databases using pertinent keywords, finding a total of 66 related studies. After filtering and in depth reviewing, a total of 12 studies were included in this review. Results: The main results reveal the importance of this ion for human health, finding evidence both in animals and human beings that suggest pathological changes in the gland as its relationship with the occurrence of subclinical hypothyroidism, and potentially cancer of the thyroid gland. In Chile, nitrate is not considered a critical contaminant so its regular measuring and control is not enforced. Conclusions: In light of the present review we believe that there is evidence to consider nitrate as a critical contaminant whose measurement, registration and correct implementation of valid policies would have a direct benefit for the population of this country. Without this information, it is not possible to quantify the damage to human health, especially in vulnerable groups residing in areas at greatest risk of exposure.

Cytogenotoxicity of rice crop water after application of the tricyclazole fungicide

ABSTRACT Tricyclazole is currently one of the fungicides recommended for the treatment of diseases in irrigated rice. However, there is relatively little information on its cytotoxic and genotoxic potential. The objective of this study was to evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of rice crop water after apllication of the tricyclazole fungicide through the Allium cepa L. test. The rice crop water samplings were collected before and 1, 15 and 30 days after application of the fungicide in rice plant shoots. The Allium cepa roots were placed in contact with the rice crop water to check for possible chromosomal abnormalities and mitotic index of the bioindicators meristematic cells. The data obtained by the Allium cepa test indicates that the application of the tricyclazole fungicide leads to an increase in the genotoxic activity in the rice crop water, through the appearance of chromosomal abnormalities, without, however, causing significant effects on the mitotic index. The major chromosomal alterations observed were anaphasic and telophasic bridges and laggard chromosomes.

High exposure to boron in drinking water and sperm parameters in Chilean young people / Exposición elevada a boro en el agua potable y parámetros de esperma en gente joven chilena

Our aim was to describe sperm parameters in residents from Northern Chile. We evaluated in 101 volunteers (18 and 30 years old) urinary and drinking water Boron levels using Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry; semen parameters were measured with standardized methods. Each individual was categorized in 3 levels of exposure: low (B levels in urine 2.94 mgL-1 or tap water 3.0 mgL-1), medium (urinary B between 2.95-7.4 mgL-1 and B in tap water with 3.0-7.0 mgL-1) and high (urinary B > 7.4 mgL-1 or tap water > 7.0 mgL-1). We found no significant differences among groups by pH, sperm concentration (45.1; 48.2 and 38 million/mL), motility 1th hour (38.1; 40.0 and 45.5 %) and vitality 1th hour (88.6; 88.0 and 76.9 %) respectively. Abnormal morphology was significant different (83.3; 90 and 83 %). Young men exposed to B in drinking water present sperm variations associated with the level of exposure. Most of these changes are positive at intermediate levels of B. For the highest exposures were observed negative changes in sperm morphology, concentration, motility and vitality, all relevant parameters of fertility. Beneficial effect is observed at medium exposure, like a "U curve".

El objetivo de este trabajo fue describir los parámetros espermáticos en residentes del norte de Chile. Se evaluaron en 101 voluntarios (18 y 30 años), los niveles urinarios y de agua potable de boro, usando "Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry". Los parámetros del semen se midieron con métodos estandarizados. Cada individuo se clasificó en 3 niveles de exposición: bajo (niveles B en la orina 2,94 mgL-1 o agua potable 3,0 mgL-1), medio (B urinario entre 2,95-7,4 mgL-1 y B en agua de beber con 3,0- 7,0 mgL-1) y alto (B urinario >7,4 mgL-1 o agua potable > 7,0 mgL-1). No se encontraron diferencias significativas entre los grupos por pH, concentración de espermatozoides (45,1; 48,2 y 38 millones/mL), motilidad a 1 hora (38,1; 40,0 y 45,5%) y vitalidad 1 hora (88,6; 88,0 y 76,9%) respectivamente. La morfología anormal fue significativamente diferente (83,3; 90 y 83%). Los hombres jóvenes expuestos a B en el agua potable presentan variaciones espermáticas asociadas con el nivel de exposición. La mayoría de estos cambios son positivos en niveles intermedios de B. Para las exposiciones más altas se observaron cambios negativos en la morfología, concentración, motilidad y vitalidad del esperma, parámetros relevantes de la fertilidad. Un efecto beneficioso se observa en la exposición media, como una "curva U".

Assessment of tributyltin contamination based on imposex in Stramonita rustica (Mollusca: Gastropoda) along southern Bahia coast, northeastern Brazil / Avaliação da contaminação por tributil-estanho baseada em imposex em Stramonita rustica (Mollusca: Gastropoda) ao longo do Litoral Sul da Bahia

Abstract This study investigated the effects of tributyltin (TBT) on the morphology of the genital system of the gastropod Stramonita rustica in southern Bahia, Brazil. For this, 330 specimens were collected during the summer of 2014 at eight sampling points to ascertain whether male sex organs had developed in addition to the complete female genital tract in females (= imposex). The analyses were made under a stereoscopic microscope. Imposex and their associated indexes, and the sterile females, exhibited the highest rates in harbors and shipyards areas. Despite the total ban of TBT in anti-fouling paints on a global scale since 2003, the results of this and other studies indicate the continued use of those paints on the Brazilian coast. This shows the inefficiency of existing legislation and the need to strengthen enforcement of the ban.

Resumo Este estudo investigou os efeitos de tributil-estanho (TBT) sobre a morfologia do sistema genital do gastrópode Stramonita rustica (Lamarck, 1822) no Litoral Sul da Bahia, Brasil. Para isso, 330 espécimens foram coletados durante o verão de 2014 em oito pontos de amostragem, para verificar se os órgãos sexuais masculinos tinham se desenvolvido para além do trato genital feminino completo (= imposex). As análises foram feitas sob um microscópio estereoscópico. O imposex e seus índices associados, assim como as fêmeas estéreis, apresentaram as maiores taxas em áreas portuárias e estaleiros. Apesar da proibição total do TBT em tintas anti-incrustantes em escala global desde 2003, os resultados deste e de outros estudos indicam a continuidade de uso dessas tintas na costa brasileira. Isso mostra a ineficácia da legislação vigente e reforça a necessidade de se cumprir integralmente o banimento.

Analysis for the presence of determinants involved in the transport of mercury across bacterial membrane from polluted water bodies of India

Abstract Mercury, which is ubiquitous and recalcitrant to biodegradation processes, threatens human health by escaping to the environment via various natural and anthropogenic activities. Non-biodegradability of mercury pollutants has necessitated the development and implementation of economic alternatives with promising potential to remove metals from the environment. Enhancement of microbial based remediation strategies through genetic engineering approaches provides one such alternative with a promising future. In this study, bacterial isolates inhabiting polluted sites were screened for tolerance to varying concentrations of mercuric chloride. Following identification, several Pseudomonas and Klebsiella species were found to exhibit the highest tolerance to both organic and inorganic mercury. Screened bacterial isolates were examined for their genetic make-up in terms of the presence of genes (merP and merT) involved in the transport of mercury across the membrane either alone or in combination to deal with the toxic mercury. Gene sequence analysis revealed that the merP gene showed 86–99% homology, while the merT gene showed >98% homology with previously reported sequences. By exploring the genes involved in imparting metal resistance to bacteria, this study will serve to highlight the credentials that are particularly advantageous for their practical application to remediation of mercury from the environment.

Impacto na saúde humana de disruptores endócrinos presentes em corpos hídricos: existe associação com a obesidade? / Impact on human health of endocrine disruptors present in environmental water bodies: is there an association with obesity?

Resumo Há evidências crescentes de que os desreguladores endócrinos (DE) podem afetar negativamente os seres humanos. Águas superficiais e subterrâneas são as principais fontes de obter a sua potabilidade, no entanto, podem ser contaminadas por DE, que não são totalmente removidos pelos processos convencionais de tratamento de água e esgoto. Alguns problemas de saúde estão relacionados à exposição dos seres humanos aos DE, sendo a obesidade um deles. Atualmente vive-se um aumento da prevalência da obesidade em todo o mundo, fato considerado preocupante, tendo em vista seu potencial impacto no sistema de saúde, pois, as principais doenças crônicas como diabetes e doenças cardiovasculares, têm a obesidade como grande fator de risco. Por meio de revisão de literatura, este artigo buscou reunir publicações científicas relacionando a exposição aos DE com a obesidade, com o objetivo de verificar a importância de sua remoção dos corpos hídricos, preservando a saúde da população e da biota aquática. A maioria dos estudos selecionados sugere associação entre DE e obesidade em humanos.

Abstract There is growing evidence that endocrine disruptors (ED) may adversely affect humans. Surface and underground water are the main sources for obtaining potable water, however they can be contaminated with ED, which are not completely removed by conventional water and sewage treatment processes. Some health problems are related to the exposure of humans to ED, obesity being one of them. There is currently an increase in the prevalence of obesity worldwide, a fact that is considered a concern in view of its potential impact on the health care system, since obesity is the major risk factor of the leading chronic diseases including diabetes and cardiovascular disease. By means of a review of the literature, this paper sought to gather scientific publications linking exposure to ED with obesity, in order to verify the importance of removal of ED from water bodies, thereby preserving the population’s health and aquatic biota. Most of the selected studies suggest an association between ED and obesity in humans.